Protocollo di coltura e screening su piastra per cellule di mammifero e insetto
Le piastre rappresentano una sezione trasversale di piastre per diversi tipi di test, crescita cellulare e conservazione. Offriamo diversi formati: 96 e 24 pozzetti per soddisfare le vostre esigenze.
Protocollo per lo screening di cellule di mammifero e insetto - Piastre da 96 pozzetti :
Materiale :
Metodo :
1. Mantenere le scorte cellulari in un terreno di crescita appropriato. Dividere le colture il giorno prima della trasfezione a una densità adeguata per garantire la crescita in fase logica al momento della trasfezione.
2. Applicare 500 ul / pozzetto di sospensione cellulare. La densità di semina ottimale dipende dalla linea cellulare; utilizzare la densità raccomandata per la linea cellulare utilizzata.
3. Trasfezionare le cellule secondo il protocollo di trasfezione stabilito. Stabilire il rapporto tra reagente di trasfezione e DNA e nutrienti rispetto a quello utilizzato per le colture su larga scala.
4. Sigillare le piastre con coperchi o guarnizioni di plastica e trasferirle in un agitatore per tutta la notte a 800 rpm e 37°C.
5. Raccogliere le cellule al momento stabilito per le colture su larga scala. Pellettizzare le cellule mediante centrifugazione a 2500g per 20 minuti a 4°C.
6. Riservare il terreno di coltura o il pellet per l'applicazione e il processo a valle.
Note :
- Il fattore più critico per la vitalità delle cellule è l'aerazione. I risultati ottimali si ottengono utilizzando shaker con diametro orbitale di 3 mm. Si sconsiglia di lavorare in piastre da 96 pozzetti utilizzando shaker con diametri standard di 25 mm.
- Le piastre di filtrazione Thomson sono un eccellente prodotto complementare per le applicazioni di purificazione a valle.
Centrifugazione massima consigliata: 3000 g.
Protocollo per lo screening di cellule di mammifero e insetto - Piastre da 24 pozzetti :
Materiale :
Metodo :
1. Mantenere le scorte cellulari in un terreno di crescita appropriato. Dividere le colture il giorno prima della trasfezione a una densità adeguata per garantire la crescita in fase logica al momento della trasfezione.
2. Aggiungere 4-5 ml / pozzetto di sospensione cellulare. La densità di semina ottimale dipende dalla linea cellulare; utilizzare la densità raccomandata per la linea cellulare utilizzata.
3. Trasfezionare le cellule secondo il protocollo di trasfezione stabilito. Stabilire il rapporto tra reagente di trasfezione e DNA e nutrienti rispetto a quello utilizzato per le colture su larga scala.
4. Sigillare le piastre con coperchi di plastica o guarnizioni e trasferirle in un agitatore per tutta la notte a 800 rpm e 37°C.
5. Raccogliere le cellule al momento stabilito per le colture su larga scala. Pellettizzare le cellule mediante centrifugazione a 2500g per 20 minuti a 4°C.
6. Riservare il terreno di coltura o il pellet per l'applicazione e il processo a valle.
Note :
- Il fattore più critico per la vitalità delle cellule è l'aerazione. I risultati ottimali si ottengono utilizzando shaker con diametro orbitale di 3 mm. Si sconsiglia di lavorare in piastre da 96 pozzetti utilizzando shaker con diametri standard di 25 mm.
- Le piastre di filtrazione Thomson sono un eccellente prodotto complementare per le applicazioni di purificazione a valle.